核酸杂交名词解释
的有关信息介绍如下:
核酸杂交(Nucleic Acid Hybridization)是指互补的核苷酸序列(DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等)通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键,从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程。以下是关于核酸杂交的详细解释:
一、基本原理
核酸杂交基于核酸变性和复性的理论。在一定的理化因素(如适当的温度、有机溶剂存在等)作用下,双链核酸分子可以解开成为单链,这一过程称为核酸的变性。而当条件恢复后,这些单链核酸分子又可以依碱基配对规律重新形成双链结构,这一过程称为核酸的复性,也即杂交。
二、影响杂交的主要因素
- 温度:杂交通常在低于Tm值(DNA的熔化温度,即一半的双链DNA解离成为单链时的温度)约15至25度的温度下进行,此时杂交速率最快。
- 盐浓度:钠离子可以增加杂交分子的稳定性,降低钠离子浓度会强烈地影响Tm值和复性速率。但当钠离子浓度超过一定值(如0.4M)时,对复性速度和Tm值的影响就不大了。
- 有机溶剂:如甲酰胺等有机溶剂能减少双链核酸的稳定性,从而影响杂交过程。
三、常用技术与方法
- 滤膜杂交:先将待检测的核酸序列结合到适当的固相支持物(如尼龙膜)上,然后与存在于溶液中的已标记探针进行杂交。根据检测样品的不同,滤膜杂交又可分为DNA印迹杂交(如Southern blot hybridization)和RNA印迹杂交(如Northern blot hybridization)等。
- 原位杂交:直接在细胞或组织切片上进行杂交,用于检测特定核酸序列在细胞或组织中的定位。
- 液相杂交:在溶液中进行杂交反应,通常用于研究核酸分子间的相互作用。
四、应用
核酸杂交技术具有很高的灵敏度和高度的特异性,已广泛应用于分子生物学和临床诊断的多个领域。例如:
- 克隆基因的筛选:通过杂交技术可以快速筛选出含有特定基因的克隆。
- 酶切图谱的制作:利用杂交技术可以绘制出DNA分子的酶切图谱,用于基因组的结构分析。
- 特定基因序列的检测:通过设计特异性探针,可以检测出基因组中特定基因序列的存在与否以及表达水平。
- 疾病的诊断:核酸杂交技术也是许多遗传病和感染性疾病诊断的重要手段之一。
综上所述,核酸杂交是一项基于碱基互补配对原理的核酸分子间相互作用技术,具有广泛的应用价值和重要的科学意义。



